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大鼠ELISA試劑盒試驗老是失敗的幾個因素

發布時間: 2022-11-14  點擊次數: 63次
   大鼠ELISA試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗體包被于酶標板上,實驗時樣品或標準品中的抗原會與包被抗體結合,游離的成分被洗去。依次加入生物s化物的抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素??贵w與結合在包被抗體上的抗原結合、生物s與親和素特異性結合而形成免疫復合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現藍色,加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值,抗原濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標準曲線計算出樣品中指標的濃度。
  大鼠ELISA試劑盒試驗時老是失敗的幾個因素分析:
  一、低信號強度
  如果ELISA讀數低于吸光度下限,且目標樣本濃度超出標準曲線范圍,則進行分析的樣本濃度可能太低,或者儀器所能分析的樣本檢測最佳條件可能未被滿足。在這種情況下,樣本所產生的檢測信號應該需要被級聯放大。
  解決方案:
  1.增加抗體的孵育時間。如果在室溫下孵育您的抗體2小時后的實驗結果并不理想,那么可以嘗試在4℃孵育過夜。如此,可允許抗原抗體大程度上的結合,并能擴大ELISA中的反應信號。
  2.增加二抗-酶結合物的濃度。ELISA中的E代表酶(通常是辣根過氧化物酶,HRP),它與底物(通常是TMB)反應后可產生鮮艷的藍色。因而,將HRP濃度提高50%或將其加倍,則會產生更強的顏色,易于檢測。
  3.充分避光,以保護TMB基質不受光照影響,并確保其能最大限度地發揮其性能??紤]到TMB對光線非常敏感,因而在黑暗中進行ELISA平板的顯色反應會產生更強的信號。
  二、重復性不好
  同一個樣本間的各個復孔的讀數有顯著性差異。
  解決方案:
  1.加樣量多少不一,操作時間長短不一。重復同一樣本時,加樣量與加樣時間理應相同,同時也應注意移液器的校準。加樣后可輕微晃動酶標板使反應液充分混合。
  2.樣本應保證一致、無污染,并應該由同一名操作人員進行操作。
  3.精密度測定方法不標準,此時理應采用正確的方法進行操作。

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